基础免疫实验:免疫沉淀反应几种实验方法
可溶性抗原与相应的抗体混合,在电解质存在的条件下,两者比例适合,即可有沉淀物出现,叫沉淀反应(Precipitation).由于沉淀反应抗原多系胶体溶液.沉淀物主要是由抗体蛋白所组成....
免疫组化:PTX3在人类急性心肌梗死组织中的表达
2)结合键的:抗体对远离蛋白质联接点的半抗原部分有最好的性,故联接时应使联接键远离半抗原的决定簇....
抗体抗原实验:半抗原——载体连接方法
2)结合键的:抗体对远离蛋白质联接点的半抗原部分有最好的性,故联接时应使联接键远离半抗原的决定簇....
免疫组化:B淋巴细胞膜表面免疫的检查
SmIg 是B 细胞的抗原识别受体,也是B 细胞的表面标志,用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig抗体,在一定条件下与淋巴细胞混合,荧光素标记的抗Ig 抗体可以与B 细胞表面的Ig 结合,在荧光显微镜下观察可见B细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B 淋巴细胞。...
免疫组化:石蜡切片免疫组化染色步骤
现用现配.将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中,停留20~30秒钟,取出稍停片刻,再入纯丙酮溶液或蒸馏水中涮去未结合的APES,置通风橱中晾干即可.用此载玻片捞片时应注意组织要一步到位,并尽量减少气泡的存在,以免影响染色结果....
免疫组化:免疫组织化学技术(用于石蜡切片)
免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(酶、荧光素、金属离子、同位素)显色来确定组织、细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry,IHC)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry,ICC)....
免疫细胞检测技术:流式细胞仪、免疫磁珠及亲和板结合分离法分选c kit+肝癌的比较
肿瘤干细胞研究需要获取高纯度、高活力、高增殖能力的肿瘤亚群细胞,并尽量避免混杂细胞、低活力、低增殖能力细胞对细胞亚群特性的干扰.笔者在前期研究的基础上,比较了流式细胞仪分选(flow cytometry sorting,FCMS)、免疫磁珠分选(magnetic cell sorting,MACS)及亲和板结合分离法(immune panning isolation)3种方法分选c kit+肝癌细胞的效果,以期找到一种分离肝癌亚群细胞的较佳方法,为肿瘤干细胞的研究奠定基础....
免疫细胞检测技术:石蜡包埋组织的流式检测问题
常规固定(多数用福尔马林)、石蜡包埋的组织块均可用于流式细胞术,但含苦味酸或汞的固定液均不宜使用.切片厚度以30~50微米为宜.切片脱蜡要干净、彻底,否则制备出的细胞悬液中碎片多,影响测定.梯度酒精水化后用胃蛋白酶或胰蛋白酶消化,消化后镜检呈单个分散状态;由于福尔马林固定可使DNA 和核蛋白产生共价交联,影响DNA和染料的化学定量结合,导致荧光强度下降,蛋白酶可其联结,改善测定的组方图质量,消化时间以能分散细胞及细胞碎片尽量少为适度,以100目尼龙筛网滤去未消化完的组织片,离心去上清液后,加入冰冷的70%...
免疫组化:Wnt10b基因对脂肪细胞和肌细胞的调控作用
Wnt10b:Wnt10b是Wnt因子家族之一,是一种胞外信号,它通过一系列复杂信号通调控胚胎发育、干细胞定向分化等生理过程.有研究表明Wnt10b基因的活性能能够组织培养的脂肪细胞的发育....
ELISA:ELISA实验数据处理
单击曲线,按右键,选择“添加趋势线”,在类型中,选择多项式;在选项中,选择显示公式,选择显示R平方值....
免疫检测分析:生物素—亲合素系统
生物素-亲合素系统(Biotin-Avidin—System,BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统.随着各种生物素衍生物的问世,BAS很快被广泛应用于医学各领域.1979年Guesdon利用生物素和亲合素间具有高度亲合力的特点,建立了标记亲合素和生物素法(LAB/BA)与桥联亲合素—生物素技术(BRAB).1981年Hsu首次报告了改进的亲合素—生物素—过氧化酶复合物法(ABC法).近年大量研究,生物素—亲合素系统几乎可与目...
免疫细胞检测技术:流式细胞仪检测凋亡:Annexin VPI双染色法
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难.这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS在细胞膜外表面.PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被而使PS在细胞膜外.Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白,最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性.对PS有高度的亲和性.因此,该蛋白可充当一的探针检测在细胞膜表面的PS.PS转移到细胞膜...
基础免疫实验:间接凝集反应
1. 间接血球凝集试验是根据红血球表面的吸附作用而建立起来的。将细菌可溶性抗原提出使之吸附血球表面,此时红血球即称为“致敏红血球”。这种致敏的红血球具有细菌的抗原性,与相应的抗血清相遇可产生凝集现象。...
免疫荧光:免疫胶体金的特性和制备
胶体金(colloidalgold)也称金溶胶(goldsol),是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液.胶体金颗粒由一个基础金核(原子金Au)及包围在外的双离子层构成,紧连在金核表面的是内层负离子(AuC12-),外层离子层H+则分散在胶体间溶液中,以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态.胶体金颗粒的基础金核并非是理想的圆球核,较小的胶体金颗粒基本是圆球形的,较大的胶体金颗粒(一般指大于30nm以上的)多呈椭圆形.在电子显微镜下可观察胶体金的颗粒形态....
免疫检测分析:放射免疫分析法原理及操作注意事项
放射免疫分析的原理:就是利用放射性核素标记抗原或抗体,然后与被测的抗体或抗原结合,形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的.它又分为两种方法....
免疫荧光:Hoechst 33258染色
A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍.将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%-80%满....
达氏Dustie:怎么用空气净化器预防流感
最近的夏季流感事件受到了大众的密切关注,对于流感相信大家都并不陌生,但是在爆发流感后我们该如何应对和该怎么预防呢?小编下面来做个知识普及。 首先常见流感是由流...
免疫细胞检测技术:亲和层析优缺点
2. 是最有效的生物活性物质纯化方法,它对生物选择性的吸分离,可以取得很高的纯化倍数.此外蛋白在纯化过程中得到浓缩,结合到亲和配基后,性质更加稳定,其结果提高了活性回收率.此外它可以减少纯化步骤,缩短纯化时间,对不稳定蛋白的纯化十分有利....
基础免疫实验:聚乙二醇(PEG)沉淀实验检测CIC
聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)是一种无电荷的直链大多糖,可非性地引起蛋白质沉淀.沉淀具有可逆性,被沉淀的蛋白质生物活性亦不受影响.不同浓度的 PEG可沉淀量不同的蛋白质,在pH值、离子浓度等条件固定时,蛋白质量越大,用以沉淀的PEG浓度越小.由于PEG6000对蛋白质沉淀具有良好的选择性,所以在IC测定中主要采用PEG6000....
ELISA:竞争ELISA方法的建立
标记完后用紫外分光光度计在分别在280nm、及403nm处测定酶标记物的A值,计算免疫球蛋白量、摩尔比值、酶结合率以及标记率....
免疫检测分析:玫瑰花环试验材料、方法及结果
4 吸收灭活小牛血清小牛血清56℃ 30min灭活后,取2体积的小牛血清,加1体积压积的家兔红细胞,混匀,置37℃水浴30min,离心沉淀,吸取上清液,4℃冰箱保存。...
免疫荧光:免疫荧光细胞化学染色方法
2、洗片:倾去存留的荧光抗体,将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次,搅拌,每次5min,再用蒸馏水洗1min,除去盐结晶....
免疫检测分析:免疫沉淀知识
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质是否在生理条件下有相互作用的有效方法.其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来.如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来.这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用蛋白....
免疫荧光:免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高性和高效价的一抗,选择合适的稀释度.由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同.因此,不可能有一种适用于所有抗原的固定剂,而是根据不同的抗原性质区别对待.根据我们使用的固定剂介绍如下,供参考....
基础免疫实验:现代免疫学研究进展概况(80年代的重要发现)
日本学者利根川进和Leder等应用杂交技术证明并克隆出编码IgV区和C区基因.同时应用克隆cDNA片段为探针证明了B细胞在分化发育过程中编码Ig基因结构阐明了Ig抗原结合部位多样性的起源,以及遗传和体细胞空变在抗体多样性形成中的作用,为此利根川进获得了1987年诺贝尔医学....
免疫荧光:免疫荧光非性染色的消除方法
(4)从组织中难于提纯抗原性物质,所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其他组织成分的抗体,以致容易混淆....
免疫荧光:免疫荧光染色技术Ⅱ
固定后以冷的0.01Mol/L pH7.4PBS液浸泡冲洗,最后以蒸馏水冲洗,防止自发性荧光....
抗体抗原实验:Fab片段抗体表达产物的纯化和鉴定
对于所获的Fab片段抗体,对某种性抗原的性鉴定,根据其所针对的抗原不同,则采用的方法也不同。主要方法有:...
免疫荧光:免疫胶体金稀释液的配五原则
免疫胶体金毕竟是含有生物活性,应用时还要面对千差万别的样品,原则上需要稀释在合适pH的缓冲液中.经验值是6-9.在这个范围内可选的缓冲主要有tris和PB,也不排除其他种类缓冲适用的可能.当使用的缓冲离子强度过大如超过0.2M时,有可能造成、层析不好或检测结果异常.离子的种类也因为免疫胶体金的生物不同而有诸多,例如钙调蛋白可能与Ca离子有关系.而卤素离子强度对胶体金稳定性似乎有特殊的作用,教科书式的NaCl调试最适标记条件就是例子....
免疫检测分析:用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线
比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比,与透光度成反比关系,利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值),用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量....
