免疫检测分析：免疫共沉淀,染色质免疫沉淀在实验操作中所要注意的关键点的主要区别
免疫共沉淀的目的是通过抗体和目的蛋白的相互作用从而捕获目的蛋白复合物,最终检测目的蛋白复合物中各成分之间的相互作用.所以实验中要注意的关键点和免疫沉淀相比,除了要注意抗体和目的蛋白相互作用的效果外,还要注意目的蛋白复合物的完整性.后者主要考虑因素是缓冲液中的去垢剂成分能否在有效目的蛋白复合物进入可溶相的情况下不目的蛋白复合物中各成分之间的相互作用.所以,免疫共沉淀实验中的关键因素除了抗体的选择外,裂解缓冲液配方中的去垢剂的成分和浓度对免疫共沉淀实验的成功与否至关重要,其选择相比免疫沉淀实验而言,要求更...
免疫检测分析：机体的天然免疫机制-正常血清的杀菌作用
机体的天然免疫机构对消灭侵入的微生物具有重要的作用。如皮肤与黏膜是抵抗外来侵害的第一道屏障。皮肤具有机械的作用，黏膜可分泌许多液体，如泪液、唾液、胃液、肠液等，其中喊含有溶菌酶，可溶解和细菌。正好血清中也含有许多杀菌的因素，如补体。乙型溶菌素及备解素系统等，可革兰氏阴性或阳性细菌。血液中的白血球及巨噬细胞对外来异物有及消化的作用，这种作用也是天然防御中的重要机制之一。...
《自然—免疫学》：曹雪涛提出抗病毒天然免疫表观调控新机制
干扰素在机体抗病毒天然免疫应答中发挥关键性的作用。在病毒感染过程中，干扰素产生的多少与持续时间受到精确调控，以确保机体清除入侵病毒的同时能避免病自身免疫损伤。目前关于干扰素表达精确调控的机制研究主要集中在天然免疫信号通蛋白，而以细胞核内RNA修饰的方式调控干扰素表达的机制尚不清楚。...
ELISA：ELISPOT (Enzyme-linked ImmunoSPOT)
抗体的生物素化标记可使抗体或其它蛋白质的ε-氨基通过手臂与酰化的生物素共价结合.其后,生物素化的可应用酶标-亲和素或荧光染料-链霉亲和素复合物来检测.小的水溶性生物素对细菌蛋白链霉亲和素具有高度亲和力是本法的设计基础....
抗体抗原实验：抗体的生物素化标记Ⅱ
抗体的生物素化标记可使抗体或其它蛋白质的ε-氨基通过手臂与酰化的生物素共价结合.其后,生物素化的可应用酶标-亲和素或荧光染料-链霉亲和素复合物来检测.小的水溶性生物素对细菌蛋白链霉亲和素具有高度亲和力是本法的设计基础....
Science：华人团队解决异种难题
上世纪90年代，医学研究者们曾尝试解决这一问题。他们给出的策略是异种移植，即在人体内移植入动物器官。在这些动物中，猪的器官在尺寸与功能上和人体器官较为接近，因此也获得了研究人员的关注。然而，猪的基因组里含有内源性逆病毒（PERV）的序列，对人体有潜在的健康风险。直接将猪的入人体，可能会导致新型疾病的。几十年里，科学家们也一直在试图解决这个难题。...
免疫检测分析：免疫共沉淀实验方法
(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性....
免疫细胞检测技术：PCR-ELISA端粒酶检测法
端粒是真核生物染色体末端的DNA-蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG).已确认端粒在基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合(如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失)中起重要作用....
免疫检测分析：ELISA竞争法普遍存在的操作问题
第二军医大学长海医院对此造成的影响进行了研究.将阴性标本94份并用生理盐水进行1:30稀释,在加入标本后按下表时间放置后再加入酶标抗体,然后检测结果如下:...
ELISA：ELISA方法的基本类型、用途及操作程序Ⅰ
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA):是酶免疫测定技术中应用最广的技术.其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 )表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除.常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大抗原,后者用于测定抗体....
ELISA：大鼠TNF-B酶联免疫分析ELISA
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中TNF-B水平.用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入TNF-B、生物素化的抗TNF-B抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色.TMB在过氧化物酶的催化下成蓝色,并在酸的作用下成最终的.颜色的深浅和样品中的TNF-B呈正相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度....
免疫荧光：组织切片制备及染色技术
(1)取材与固定：切取组织时应使用锋利的刀、剪,切取组织块时,从刀的根部开始向后拉动切开组织.组织块的厚度约为0.2~0.3cm,大小为1.5cm x 1.5cm x 0.3cm为宜.取好的组织块用10%福尔马林溶液固定24~48h....
抗体抗原实验：杂交瘤细胞的制备
4、在脾中部切开一小口,用注射器芯从一端轻轻压挤,再用无血清培养液冲洗,令细胞通过纱网,收集入平皿中,或用注射器向脾脏内注入3 ml无血清培养液,反复抽吸数次方法获取细胞,再制成细胞悬液亦可....
基础免疫实验：现代免疫学研究进展概况(90年代至今的研究进展)
人类基因组计划(human genome project, HGP),1985年由美国科学家提出,于1990年正式启动.我国于1994年在陈竺、杨焕明等著名学者的下启动了HGP, 参与测序区域占人类整个基因组的1%....
免疫细胞检测技术：免疫磁珠分选细胞的操作步骤和注意事项
2.用20倍体积PBE洗细胞一次,再加PBE(0.3ml/1×108细胞)充分混悬细胞后,加入相应二抗包被的超微磁珠,混匀后置8~15℃孵育10~15分钟....
免疫检测分析：免疫组化DAB法 显示过氧化物酶
16. 除去,DAB显色10′(在显微镜下观察染色程度控制染色时间).蒸馏水冲洗....
抗体抗原实验：人用单克隆抗体质量控制技术指导原则
SP2/0或其他适宜的骨髓瘤细胞系.应为不合成或不分泌免疫球蛋白链型,具有符合骨髓瘤细胞的染色体特征,并有明确的来源历史及符合要求的保存条件....
基础免疫实验：间接凝集反应原理及分类
载体的存在使反应的性得以大大提高.间接凝集反应的优点为:①性强:间接凝集反应是最性的血清学反应方法之一,可以检测到微量的抗体和抗原;②快速:一般1h～2h即可判定结果,若在玻板上进行,则只需几分钟;③性强;④使用方便、简单....
抗体抗原实验：多克隆抗体的免疫电泳
免疫电泳又称为或免疫球蛋白电泳技术，这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM，IgG，IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中，首先利用蛋白质的量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离，然后将性的抗体引入到与电泳方向平行的凹槽中，在抗原和抗体的扩散过程中，抗原和抗体适当比例的结合会导致沉淀的产生。0.85%盐不仅可以终止扩散过程也可用于洗去未结合的蛋白，抗原和抗体结合所形成的沉淀线即可以观察也可利用染色方法观察。...
免疫细胞检测技术：细胞凋亡的三种流式检测方法
细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间.利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞....
免疫检测分析：均相酶免疫测定
均相酶免疫测定是将半抗原或小抗原如药物、激素、毒品、兴奋剂等与酶结合制成酶标记物,酶与抗原(半抗原)结合后仍保留酶和抗原(半抗原)的活性.测定时将待测样品、酶标记物、性抗体和底物溶液加在一起,待抗原—抗体和酶底物反应平衡后,即可直接测定结果,无需分离步骤,整个检测过程都在均匀的液相内进行.依据实验原理可分为竞争结和非竞争结两种类型....
免疫组化：基因敲除小鼠H-Pgds的表达检测
图A-D为免疫组化检测造血-前列腺素D合成酶在基因敲除小鼠肠粘膜中的表达,阴性对照不添加H- pgds抗体....
基础免疫实验：细胞受体结合免疫测定CIC法
细胞受体结合免疫测定法是根据CIC可与某些细胞表面的Fc受体或补体受体结合而建立的细胞技术,这类方法有灵敏度较高,性较强等优点,但需进行活细胞培养或细胞分离,影响因素多,重复性较差,目前仅适用于实验研究.此类技术有多种方法....
免疫细胞检测技术：淋巴细胞增殖功能的测定
T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝原受体,在性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖.植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA),抗CD2、抗CD3McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS,对小鼠有作用)则刺激B细胞发生增殖;美洲商陆(PWM)、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用.最近发现,integrin家族中VLA组中某些受体与相应配体结合后也能活化T细胞.目前临床上最常选用 PHA刺激PBMC,根据形态学或氚...
免疫细胞检测技术：靶细胞杀伤实验：Cr51法
将分离的外周血T细胞, 培养7d后按照DC:T = 1:10的比例分别加入自身细胞致敏DC,细胞系致敏DC及未致敏DC, 继续培养3-4d后收集T细胞, 此即为效应细胞CTL....
免疫检测分析：胶体金免疫层析法对抗幽门螺杆菌相关蛋白A抗体的检测
胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金在弱碱下带负电荷，可与蛋白质的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。...
基础免疫实验：免疫复合物的测定
由于抗原与抗体比例不同,所形成的IC大小各异,通常有三种形式:一是抗原抗体比例适当时,形成大的不溶性IC(大于19S),易被细胞捕获、和清除.二是抗原量过剩时,形成小的可溶性IC(小于6.6S),易透过肾小球滤孔随尿排出体外.三是抗原量稍过剩时,形成中等大小的可溶性IC(8.8-19S),它既不被细胞清除,又不能通过肾小球滤孔排出,可较长时间游离于血液和其他体液中,又称循环免疫复合物(circulatingimmunocomplex,CIC)....
免疫细胞检测技术：靶细胞杀伤实验：MTT和CCK8比较
WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙的formazan.细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅.对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点.首先,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤.其次,W...
ELISA：酶联免疫吸附实验（ELISA）基本原理
1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法.这一方法的基本原理是:①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性.②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性.在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体...
抗体抗原实验：抗体的生物素化标记Ⅰ
8.将样品上1ml的筛柱,以PBS缓慢洗脱,收集1ml/管,蛋白质在1-3ml之间洗下;...