免疫组化:基因敲除小鼠H-Pgds的表达检测
图A-D为免疫组化检测造血-前列腺素D合成酶在基因敲除小鼠肠粘膜中的表达,阴性对照不添加H- pgds抗体....
基础免疫实验:细胞受体结合免疫测定CIC法
细胞受体结合免疫测定法是根据CIC可与某些细胞表面的Fc受体或补体受体结合而建立的细胞技术,这类方法有灵敏度较高,性较强等优点,但需进行活细胞培养或细胞分离,影响因素多,重复性较差,目前仅适用于实验研究.此类技术有多种方法....
免疫细胞检测技术:淋巴细胞增殖功能的测定
T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝原受体,在性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖.植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA),抗CD2、抗CD3McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS,对小鼠有作用)则刺激B细胞发生增殖;美洲商陆(PWM)、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用.最近发现,integrin家族中VLA组中某些受体与相应配体结合后也能活化T细胞.目前临床上最常选用 PHA刺激PBMC,根据形态学或氚...
免疫细胞检测技术:靶细胞杀伤实验:Cr51法
将分离的外周血T细胞, 培养7d后按照DC:T = 1:10的比例分别加入自身细胞致敏DC,细胞系致敏DC及未致敏DC, 继续培养3-4d后收集T细胞, 此即为效应细胞CTL....
免疫检测分析:胶体金免疫层析法对抗幽门螺杆菌相关蛋白A抗体的检测
胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液,由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金在弱碱下带负电荷,可与蛋白质的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结合是静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。...
基础免疫实验:免疫复合物的测定
由于抗原与抗体比例不同,所形成的IC大小各异,通常有三种形式:一是抗原抗体比例适当时,形成大的不溶性IC(大于19S),易被细胞捕获、和清除.二是抗原量过剩时,形成小的可溶性IC(小于6.6S),易透过肾小球滤孔随尿排出体外.三是抗原量稍过剩时,形成中等大小的可溶性IC(8.8-19S),它既不被细胞清除,又不能通过肾小球滤孔排出,可较长时间游离于血液和其他体液中,又称循环免疫复合物(circulatingimmunocomplex,CIC)....
免疫细胞检测技术:靶细胞杀伤实验:MTT和CCK8比较
WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙的formazan.细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅.对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点.首先,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤.其次,W...
ELISA:酶联免疫吸附实验(ELISA)基本原理
1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法.这一方法的基本原理是:①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性.②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性.在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体...
抗体抗原实验:抗体的生物素化标记Ⅰ
8.将样品上1ml的筛柱,以PBS缓慢洗脱,收集1ml/管,蛋白质在1-3ml之间洗下;...
免疫检测分析:时间分辨荧光免疫分析技术在HBVM检测中的应用
TRFIA法使用上海新波生物技术有限公司生产的Anytest-2000型时间分辨荧光免疫分析系统及配套试剂.ELISA法使用奥地利BIOELLHTⅡ型自动酶标仪,试剂由标佳生物技术有限公司提供....
ELISA:ELISA常见实验条件
阴性对照的基本组成也应该尽量与检测样本的组成一致,最好先行检测确定其中不含待检物质.比如,检测人血清标本时,阴性对照应该选择正血清;检测免疫动物血清中抗体效价时,阴性对照应该选择该动物的免疫前血清....
免疫细胞检测技术:流式检测凋亡的前提条件
在进一步理化处理(样本制备)下,凋亡细胞易受影响而破损,未凋亡或准凋亡细胞易受影响而发生短暂或永久的凋亡变化.所以制备过程极易造成假阳性和假阴性,又容易形成弱荧光区域严重的不可消隐的延散性干扰.原代分离的实体组织的细胞样本、原代分离培养的细胞样本、贴壁生长的传代细胞样本都很难避免上述情况的出现,即不适合做流式凋亡检测.只有离散组织样本(血细胞)、个别极易分散的组织样本(脾、胸腺等)、悬浮生长且极易分散的细胞样本能满足流式凋亡检测的制备要求.注意,这里说的是所有的在流式上进行的凋亡检测,不存在有的样本不...
免疫检测分析:金免疫技术
金免疫技术是继放射标记、酶标记、荧光标记技术应用以来的一种新检验技术,于1971年由Faulk和Taylor始创,将胶体金与抗体结合,最初用于免疫电镜技术,后来陆续建立了间接免疫金染色法、光镜水平的免疫进染色、免疫金银染色等方法.目前,金免疫技术还应用于金免疫测定中,由于金标记常与膜载体配合,形成特定的测定模式,因此典型的如斑点免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等,已是目前应用广泛的简便、快速检验方法....
免疫检测分析:固相溶血试验
1. 鼻疽抗原、鼻疽阳性及阴性血清、冻干补体鼻疽抗原作1∶5、鼻疽阳性及阴性血清作1∶2、冻干补体作1∶3稀释;...
免疫检测分析:酶联免疫吸附法在饲料安全检测中的应用
酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是免疫酶一种,是一项先进的免疫化学测定技术.因其具有性高、性强、结果易于检测,是饲料安全检测中某些违禁药品和添加剂,有害微生物的筛检和毒素的检测,是饲料安全检测中一项新的检测技术....
ELISA:常见的原装ELISA试剂盒
最先介绍,非专业人士想不到的食品安全检验ELISA试剂盒,就是指食品中的激素、药物、霉菌毒素、过敏原残留、转基因产品的检测试剂盒,以及微生物、维生素等的检测产品.包括植物病毒、细菌、真菌、植物激素和转基因作物的农业诊断试剂盒以及动植物疾病诊断类如猪、牛、羊、马等家畜和禽类以及宠物类检测试剂盒....
免疫荧光:免疫印迹法的自动化应用进展
前言:免疫印迹法是一种对生物样本中的性蛋白进行检测分析的技术,是检测蛋白性、表达与分布的最常用方法。但是传统操作难以满足实验室高通量,规范化的检测要求。因此为适应临床诊断的需求,新的印迹法技术被不断的探索和发展。欧蒙作为全球血清学诊断领域的领导者,经过多年的探索和完善,提出了一套完整的免疫印迹法检测自动化解决方案,这大大提高了免疫印迹法检测的效率,实现了免疫印迹法检测结果的标准化判读和评估。...
基础免疫实验:免疫染色可能的交叉反应
在免疫染色法中,最大的问题也许是抗体与所研究的蛋白质之外的其他物质发生交叉反应,这是一个非常严重的问题.标本中抗原表位非常复杂,包括细胞内所有蛋白质,而且每种蛋白质可能存在不同的变性程度.固定后抗原的这种特性非常适合于低亲和力反应.这时可以观察到许多蛋白质的局部浓度非常高,因为它们被固定于基质中.局部高浓度的抗原将有助于低亲和力抗体与抗原结合,但同时也增加了交叉反应的可能性.另外,用这种方式固定的,抗原与抗体测试时所使用的抗原在形式上是不同的.所有这些问题,即不同程度的变性显示出的大量抗原表位,使得不...
抗体抗原实验:创建轻链改组噬菌体文库
以前转载过一篇文章,是介绍:如何选择合适的一抗和二抗,有的客户后续也在询问:这么多生产抗体的公司,如何选择正确的质量比较好的抗体呢?...
抗体抗原实验:如何选择质量好的抗体——PASS原则
以前转载过一篇文章,是介绍:如何选择合适的一抗和二抗,有的客户后续也在询问:这么多生产抗体的公司,如何选择正确的质量比较好的抗体呢?...
基础免疫实验:直接凝集实验(Direct agglutination react
颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应的抗体血清混合后,在电解质参与下,经过一定时间,抗原抗体凝聚成可见的凝集块,这种现象称为凝集反应.血清中的抗体称为凝集素(Agglutinin),抗原称为凝集原(Agglutinogen)....
免疫检测分析:免疫透射比浊法
当光线通过一个浑浊介质溶液时,由于溶液中存在混浊颗粒,光线被吸收一部分,吸收的多少与混浊颗粒的量成正比,这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法.这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物,导致浊度的改变,再进行透射比浊测定,一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法,称为免疫透射比浊法.其原理是,利用抗原和抗体的性结合形成复合物,通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法....
抗体抗原实验:抗菌血清的制备
本实验制备了抗菌血清。抗体是机体接受抗原刺激后产生的一种具有免疫性的球蛋白。在免疫学实践,为制备抗体常以抗原性物质(细菌、病毒、类毒素、血清及其他蛋白质)给动物注射。经过一定时间后,动物血清中可以产生大量的性抗体。这种含有性抗体的血清称为免疫血清。免疫血清不但对传染病的诊断、预防和治疗有重要意义,而且对,肿瘤以及某些科研工作也有重要意义。...
免疫细胞检测技术:关于Western Blot实验的一些小细节和小知识
缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH.电泳时正极与负极都会发生电解反应,正极发生的是氧化反应(4OH--4e->2H2O+O2),负极发生的是还原反应(4H++4e->2H2),长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱.一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,是溶液两极的pH保持基本不变....
免疫细胞检测技术:细胞内细胞因子的流式细胞仪检测
随着研究的进展,仅仅对细胞进行定量和活性的检测已不能满足需要.在单细胞水平研究细胞因子的表达能力对研究细胞因子在疾病中的作用越来越显的重要无比.目前检测单个细胞特定细胞因子的表达手段包括:ELIspot、原位杂交、免疫细胞化学、性稀释分析(limiting dilution analysis,LDA)和单细胞PCR,应用原位杂交技术和免疫组化方法观察细胞因子蛋白表达及mRNA表达可以识别Th1和Th2细胞,此方法可获得较强的细胞内信号,但此方法工作量大、主观性强,难以进行大样本检测,且人识别能力有很大的局...
免疫检测分析:E 玫瑰花环形成试验的原理及方法
正外周血中T 细胞在体外能直接和绵羊红细胞(SRBC)结合形成玫瑰花样细胞团。这是因为人的T细胞膜上具有能和SRBC 膜上的糖蛋白相结合的受体,称为E 受体。已E 受体是人T 细胞所特有的表面标志,因此本试验可作为人外周血T 细胞的鉴定和计数,同时作为人细胞免疫功能状态的一个检测指标,也是分离T 细胞的常用方法之一。...
基础免疫实验:冷凝集实验知识及操作步骤
玻璃试管10支,分别加入生理盐水200微升,第一支加入待测血清200微升,混匀后取出200微升加入第二支试管,依次倍比稀释到第九支试管,取出200微升弃去;同时准备好2%“O”型红细胞500微升,操作离心后“O”型红细胞用生理盐水洗涤3次,取离心洗涤后的红细胞100微升加入4.9毫升的生理盐水中即可.最后加入200微升配好的红细胞到10支试管中,混合后放入4℃冰箱中3小时后判断凝集现象....
免疫细胞检测技术:靶细胞杀伤实验:CFSEPI法
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免疫检测分析:免疫电镜胶体金标记法
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜.它是利用胶体金在碱性中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记.当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色.在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨.因此,免疫电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于生物学的各个方面,并取得了要喜的进展,解决了一些过去未能解决的问题,80年代以来似有取代免疫电镜 PAP技术的趋势.胶体金标记抗体技术在电镜水平应用有许多优点:首先,手续不如PAP法烦琐,不...
基础免疫实验:如何设定抗体实验中各种样品选择的条件
请先确定您要检测的种属和使用的实验方法,然后查找相关产品,根据说明书上描述的“适用种属和实验方法”来确定合适的抗体.如果说明书中有明确您要检测的种属和实验方法均经过检测,则您可以放心地购买该产品....
