核酸基因技术--生物岛网

不同患者的机体基因组或会影响基因编辑疗法的有效性和安全性

本文研究增加了一些新,即基因编辑或许需要适应每个病人的基因组,从而才能够确保被靶向作用的基因或附近DNA序列中不会出现突变。医学博士Stuart Orkin说道,人类的DNA序列并不相同,而且被认为是“正常”的DNA序列或许也并不能解释所有的差异;在设计治疗性编辑的靶向系统时我们推荐需要将常见的变异考虑在内,同时也为了能最大限度地发挥功效,减少患者潜在的安全隐患。...

Immunity:我国学者在抗病毒免疫研究方面获得重要突破

RNAi是一种在真核生物中高度保守的后基因沉默机制,并已被在真菌、植物和无脊椎动物中起到关键的抗病毒免疫作用。在RNAi抗病毒过程中,病毒RNA复制所产生的双链RNA(dsRNA)被宿主Dicer蛋白识别并切割成小干扰RNA(siRNA)。这些病毒衍生的siRNAs(vsiRNAs)被转移到 RNA 沉默复合体 (RISC),并介导同源病毒RNA的降解,从而达到抗病毒的目的。尽管RNAi在哺乳动物中也保守存在,并被广泛用于生命科学与技术研究,然而,在哺乳动物中,RNAi是否同样能起到抗病毒免疫作用仍不清楚...

DNA提取与纯化:人外周血白细胞DNA制备

  ,释出血红蛋白及细胞核,在反应体系中含一定浓度蔗糖,核膜内外的渗透压,以防止核膜破裂,通过离心等手段即可获得白细胞的细胞核。向核悬液中加入SDS核膜,并使DNA从核蛋白中解离...

研究人员开发手术中监测喉部和迷走神经的技术

  甲状腺或颈椎前手术后的喉神经损伤影响到约10%的患者。为了防止这些损伤,医生通常在手术期间在不同时间间歇地监测这些神经。但是通过间歇监测,会遗漏可能的神经损伤。连续刺激使得医生在发生损伤之前就可以看到损伤并采取预防措施,但到目前为止,唯一的连续监测方法是要求医生将电极放在颈部迷走神经周围(迷走神经从脑干延伸到腹部,负责声音和吞咽功能,控制心脏、肺部和消化),这种方法是侵入性的并且可能导致手术并发症。...

Science子刊:重大突破!注射一种抗体混合物有望HIV感染

  文章中,研究者通过研究首次发现,利用“基因魔剪”CRISPR/Cas9能够完全关闭HIV-1的复制,并且消除动物机体受感染细胞中的病毒。本文研究基于研究人员2016年的一项概念验证研究,此前研究人员利用转基因的大鼠和小鼠模型进行研究,研究者将HIV-1的DNA掺入到了动物模型机体每个组织的基因组中;结果发现,这种策略能够去除实验动物机体中大部分组织基因组中的HIV-1靶向片段。...

基因和干细胞治疗可以重构的受损的骨骼

蒙大拿大学的研究人员进行的一项新研究,经燃烧产生的空气污染颗粒(CDNPs)存在于年轻的城市居民大脑中,这项研究一时间引起了社会人员的高度关注。 研究人员利用透射电子显微镜观察了大量墨西哥城儿童、青少年以及年轻人的神经元、神经胶质细胞、脉络丛和神经血管中存在的污染颗粒,这些人均长期于高于US-EPA标准的污染颗粒中。日前该研究发表在《阿尔茨海默病》上。...

空气污染颗粒伤肺又伤脑,恐引发阿尔茨海默症!

蒙大拿大学的研究人员进行的一项新研究,经燃烧产生的空气污染颗粒(CDNPs)存在于年轻的城市居民大脑中,这项研究一时间引起了社会人员的高度关注。 研究人员利用透射电子显微镜观察了大量墨西哥城儿童、青少年以及年轻人的神经元、神经胶质细胞、脉络丛和神经血管中存在的污染颗粒,这些人均长期于高于US-EPA标准的污染颗粒中。日前该研究发表在《阿尔茨海默病》上。...

DNA提取与纯化:动物细胞基因组DNA的制备

  、脂类和糖类等分离,又要保持DNA的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋...

DNA提取与纯化:质粒抽提的部分问题

  消化后,RNA 变得比较小了,其残留对酶切反应几乎没有影响.如果要彻底去除残留得 RNA,则需要更烦琐的操作.基本上是采用两种办法:一是利用酶/弱去污剂部解细菌,在抽提时只...

DNA提取与纯化:质粒DNA的大量制备

1)将 30ml 含有目的质粒的细菌培养物培养到对数晚期(DNA 600约0.6).培养基中应含有相应抗生素,用单菌落或从单菌落中生长起来的小量液体闭关物进行接种....

基因编辑工具CRISPR的十大神奇用途

就像许多疾病那样,癌症是人们基因突变的结果。研究人员认为,基于CRISPR的疗法将来有可能减缓肿瘤扩散的速度,甚至能够完全治愈癌症。在这个领域,中国已经取得了初步进展。2016年10月份,中国一位肺癌患者成为世界上首个接受细胞注射的人,这些细胞利用被利用CRISPR修改过。由成都四川大学肿瘤学家卢博士(Lu You)领导的研究人员,修改了从病人自身血液中提取的免疫细胞,并禁用了可产生某种特定蛋白质的基因,这种蛋白可帮助癌细胞劫持正常细胞进行繁殖。研究人员认为,如果没有这种蛋白质,癌细胞呼吁不会繁殖,免疫系...

DNA提取与纯化:质粒抽提的8大窍门

  近20年来,在学术文献中报道新的纯化方法的文章几乎每周发布一篇,尽管这些方法的优点已被他们的发明者所,但极少有方法被广泛接受.实际上,许多新方法只是在旧方法的基础上做了少许改进或修改.一般来说,这些初始的旧方法已相当令人呢满意,并且仍有广泛的用途....

质粒提取:质粒DNA的纯化

  近20年来,在学术文献中报道新的纯化方法的文章几乎每周发布一篇,尽管这些方法的优点已被他们的发明者所,但极少有方法被广泛接受.实际上,许多新方法只是在旧方法的基础上做了少许改进或修改.一般来说,这些初始的旧方法已相当令人呢满意,并且仍有广泛的用途....

上海生科院等设计出高效精确基因靶向整合的新策略

近日,《细胞研究》期刊在线发表了题为《运用CRISPR/Cas9 技术实现以同源臂介导的末端接合为基础的靶向整合》的研究论文,该研究由中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创新中心杨辉研究组、基因编辑平台施霖宇团队与苏州灵长类研究平台孙强团队合作完成。该研究设计了一种以同源臂介导的末端接合(Homology-Mediated End Joining, HMEJ)为基础的基因敲入策略,它在很多种系统(体外培养的细胞、动物胚胎和体内组织)中比现有的基因敲入策略的效率都要高。基于更高效...

JCI:免疫细胞产生伤口愈合因子 有助开发肠病治疗新方法

  一些特定的免疫细胞能够产生愈合因子促进小肠进行伤口愈合,这一发现或有助于开发治疗炎症肠病的新治疗方法。美国乔治亚州立大学和密歇根大学的研究人员领导了该研究并将...

聚焦ASCO丨迈出癌症早筛第一步:MSKCC联合Grail公司开发出首个高深度液态活检方法

  MSKCC研究人员还表示,他们发现含有某个特定突变的癌症组织细胞所占比例和血浆中突变的检测能力间具有强相关性。换句话说,肿瘤早期的克隆突变要比后期形成的子克隆突变更容易在循环系统中检测到。...

质粒提取:质粒的制备

  质粒的提取方法很多,大多包括3个主要步骤:细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化.本实验以碱裂解法为例,介绍质粒的抽提过程....

肝脏芯片登场!器官芯片能否取代动物进行毒性测试?

4月11日,FDA食品门的毒理学高级顾问Suzanne Fitzpatrick在一则博客上公布了FDA的这一动向。虽然这类芯片是被设计用于测试药物的,但Fitzpatrick所在的部门也想用它们来试一试单个器官对膳食补充剂和化妆品等产品的反应。他们还能用器官芯片来测试食源性病原体影响特定器官的具体过程。FDA的食品安全科学家们将首先评估人类肝脏芯片,接着会测试肾脏、肺和肠道模型。...

逆转衰老重磅研究!端粒长度不够,RNA来帮忙!

卫理公会研究所心血管病研究主任John P. Cooke博士及其同事于昨日在线发表了一篇题为“端粒酶mRNA逆转早衰细胞老化”的Research Letter描述他们的研究,这项研究将刊印在8月8日的美国心血管疾病领域的医学期刊——美国心脏病学会期刊上。...

异体CAR-T能够有效杀灭T细胞恶性肿瘤,同时维持正常免疫功能

  结果似乎是意料之中,毕竟在T-NHL中,T细胞本就是肿瘤细胞。而正常情况下,PD-1与其配体结合会癌性T细胞的增殖,那么当PD-1基因发生突变或者用药物了PD-1的活性后,对应的则是激活癌性T细胞的活性。...

DNA提取与纯化:植物总基因组DNA提取纯化方法综述

植物组织材料的采集与保存对提取DNA 的产量和质量有很大影响.通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料,采集的过程中应尽可能使组织材料保持水分,在取样时立即用浸湿的纱布包裹采集的组织材料,放置在密闭的冰盒中,这样可使组织材料3~5 d 仍然保持新鲜.野外远距离采集样本时,在可能的条件下冷冻保存(如放置于液氮中) ;当不具备冷冻条件时, 最好用盛有无水CaSO4 的瓶子分别保存, 使其迅速干燥, 这种方法可将材料保存数月,返回后应尽快进行DNA 的提取工作.对具有大量次生代谢物(如丹宁、酚类、醌类等) 的植物材...

光动力疗法在某些皮肤肿瘤中的应用

PDT 的基本过程为生物体内的内源性或者外源性 光敏性物质受到相应波长的光(如可见光、近红外光或 者紫外光)照射后,产生大量活性氧,活性氧与体内多 种生物大相互作用,产生细胞毒性作用,进而导致 细胞受损乃至死亡,从而达到治疗目的[1]。 5-氨基酮戊酸(ALA)及其甲基衍生物(MAL)都是 临床上常用的光敏剂。ALA 是生物体的内源性物质, 是动物血红素和植物叶绿素生物合成的前体物质。正 常情况下,机体通过细胞内血红素的含量负反馈 ALA 合成酶,从而控制 ALA 的生成量,使机体不会产生过量的 ALA。...

裂谷热病毒感染宿主细胞机制

  裂谷热病毒是一种布尼亚病毒。1930年,它首次是在肯尼亚的绵羊中分离出来的。裂谷热病毒的扩散给非洲造成严重的经济后果。这种病毒还会导致接触过被它污染的或者被感染的蚊子叮咬的动物的人患上严重的疾病,从而导致致命性的重症脑炎和出血热。因此,裂谷热病毒也是一种重大的公共卫生。在2000年,这种病毒扩散到非洲之外的沙特阿拉伯和也门。有人担忧它可能也扩散到亚洲和欧洲。...

质粒提取:煮沸裂解法小量制备质粒DNA

从琼脂平板上挑取一个单菌落,接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长),然后从中纯化质粒,质粒的提纯几乎总是如此.现在使用的许多质粒载体(如pUC系列)都能复制到很高的拷贝数,惟致只要将培养物放在标准LB 培养基中生长到对数晚期,就可以大量提纯质粒.此时,不必性地扩增质粒DNA.然而,较长一代的载体(如pBR322)由于不能如此地复制,所以需要在得到部分生长的细菌培养物中加入氯霉素继续培养若干小时,以便对质粒进行性扩增.氯霉素可宿主的蛋白质合成,结果了细菌染色体的复制,然而,松弛型质粒仍可继续复...

质粒提取:质粒提取详尽版

从琼脂平板上挑取一个单菌落,接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长),然后从中纯化质粒,质粒的提纯几乎总是如此.现在使用的许多质粒载体(如pUC系列)都能复制到很高的拷贝数,惟致只要将培养物放在标准LB 培养基中生长到对数晚期,就可以大量提纯质粒.此时,不必性地扩增质粒DNA.然而,较长一代的载体(如pBR322)由于不能如此地复制,所以需要在得到部分生长的细菌培养物中加入氯霉素继续培养若干小时,以便对质粒进行性扩增.氯霉素可宿主的蛋白质合成,结果了细菌染色体的复制,然而,松弛型质粒仍可继续复...

科学家发现:2 型糖尿病治疗新方向

全球有近 4 亿人患有 2 型糖尿病,而这一数字预计在未来几十年将会急剧增加。肥胖是这个问题日益严重的主要原因,白色脂肪组织是预防 2 型糖尿病发展的第一道防线。一个健康的白色脂肪组织可以储存脂肪,从而防止其他关键代谢器官 (如肝脏和骨骼肌) 过量脂肪堆积的有害影响。这将导致炎症和胰岛素功能的失调,从而促进从血液到组织的葡萄糖摄取。...

瘫痪小鼠在接受干细胞移植之后恢复知觉

脊椎损伤往往会导致瘫痪的发生,而到目前为止脊椎的移植仍是挑战性巨大的手术。最近,来自以色列的Shulamit Levenberg博士等人将人源的干细胞移植入大鼠受损脊椎中,这些干细胞是由口腔黏膜上皮的细胞去分化形成的,它能够分化形成支持性细胞,并且通过分泌因子促进神经元的生长与存活。...

质粒提取:聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA

PEG/ MgCl2 沉淀法与用柱层析和CsCl-溴化乙锭平衡离心纯化质粒DNA的主要区别在于:他不能有效分离带缺口的环状质粒和闭合的环状质粒.后两种方法用于纯化易产生缺口的特大质粒(>15kb)和用于生物物理测量的闭合环状质粒是首选.不过,用PEG/ MgCl2 沉淀法纯化的治理不仅可用于所有克隆中的酶学反应(包括DNA测序),还可用于高效转染哺乳动物细胞....

血友病基因疗法恢复因子 VIII 水平,挺进临床 3 期

  今天,BioMarin Pharmaceutical 宣布其以前报告过的针对在研新药 BMN 270 的临床中期结果的数据更新,该基因疗法用于治疗重度 A 型血友病。  在这项标签的 1 / 2 期研究...

张锋教授Nature子刊发文:编辑人类基因组需谨慎!

  先简单介绍一下CRISPR基因编辑技术的原理。这一技术需要两类关键,一类是能够剪切DNA的酶(如Cas9和Cpf1),另一类则是负责将这些酶带到特定区域的向导RNA(gRNA)。在这两类的作用下,CRISPR系统能有效地对研究人员选定的基因组位点进行高效、精准的剪切,使得基因组编辑的大规模应用成为可能。人们畅想,使用CRISPR基因编辑技术,我们或许很快就能修复患者的基因,使他们健康生活。...