用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织,或用裂解结合缓冲液振荡重悬培养细胞,然后加入抽提试剂去除非蛋白成分,离心分离即可得到总蛋白;简便高效,30-60分钟内完成提取.试剂盒可进行100次提取,可在1.5ml离心管微量提取也可大规模制备.每次可提取1～100 mg实体组织或1´107 细胞.一次从10-100mg实体组织提取的总蛋白的量通常足以进行数十次Western Blot或免疫沉淀.适用：...

内参是最容易被忽略的一项.我们知道,要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础.特别表达量不高时,上样量的差别就很可能影响结果的分析.所以你需要内参....

这种称为“micro-western arrays”(微印迹分析)的方法能将蛋白检测常用实验：Western blot的识别能力,和DNA芯片检测的高通量能力结合起来,帮助科学家们一次实验就可以观测到细胞中各种蛋白之间的网络系统,节省了每次反复实验的人力和物力....

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出.又称为色层法、层析法....

脑啡肽(Enk)N端5肽线形结构是与δ型受体结合的基本功能区域,干扰素(IFN)是一种广谱抗病毒抗肿瘤的细胞因子.黎孟枫等人化学合成了 EnkN端5肽编码区,通过一连接3肽编码区与人α1型IFN基因连接,在大肠杆菌中表达了这一融合蛋白.以体外人结肠腺癌细胞和多形胶质瘤细胞为模型,采用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法证明该融合蛋白肿瘤细胞生长的活性显著高于单纯的IFN,通过Naloxone竞争阻断实验证明,活性的增高确由 Enk导向区介导....

　　Survivin是近年来发现的一种细胞凋亡蛋白家族,除具有较强的细胞凋亡作用外,还有调节细胞周期和肿瘤血管等多种生物学特性.它选择性表达于多种常见的恶性肿瘤,而在癌旁正常组织和分化组织中不表达.PTEN是人类发现的第1个具有酪氨酸磷酸酶作用的抑癌基因,在调控细胞生长以及凋亡过程中也发挥着重要的作用.本文利用免疫组化技术检测Survivin、PTEN和cyclinD1蛋白在骨肉瘤中的表达,初步探讨Survivin在骨肉瘤发病机理中的作用以及其与PTEN、cyclinD1相互间的关系....

　　(2)将糊状物移入3号砂芯漏斗中,用蒸馏水淋洗.如此重复,每加一次去离子水,浸泡一段时间,再进行抽滤,至洗涤液pH等于4即可(pH试纸试)....

(5) 取出含菌块的离心管置碎冰上,待菌块溶解后,以液体均匀悬浊的.再加入10 mL lysis buffer 轻轻悬浮的....

遗传密码有64种,但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分.那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons),那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons).实际上用做蛋白表达或生产的每种生物(包括大肠杆菌,酵母,哺乳动物细胞,Pichia,植物细胞和昆虫细胞)都表现出某种程度的密码子利用的差异或偏爱.大肠杆菌、酵母、果蝇、灵长类等每种生物都有独特的8个密码子极少被利用[1].有趣的是,灵长类和酵母有6个同样的利用率低的密码子.大肠杆...

　　易于生长和控制;用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵;有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择.但是,在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工,常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象....

　　(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等.植物材料必须经过去壳,脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同,其中所含生物大的量变化很大,另外与季节性关系密切.对动物组织,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理.另外,对预处理好的材料,若不立即进行实验,应冷冻保存,对于易分解的生物大应选用新鲜材料制备.细胞的破碎...

　　固相pH梯度分辨率高,故使用预窄pH范围的分离,对未知样品,应先用宽pH范围的载体两性电解质聚焦大致确定其等电点,再用固相pH梯度凝胶精确分离,对复杂成分样品和双向电泳的第一相,应采用宽范围的固相pH梯度凝胶....

　　NC膜与蛋白质的结合无任何性，因此作为性检测靶蛋白的探针-一抗蛋白也能与NC膜结合，而一旦这种结合情况发生，当加入二抗后，背景上将出现许多非性条带，而则势必造成目标蛋白的不可检测性。因此Western印迹技术的性、可行性将取决于能否对NC膜上一些蛋白质潜在结合位点进行有效封闭。在实际操作中这些结合位点一般用脱脂奶粉封闭，也可用血清白蛋白封闭。如果操作中加蛋白封闭后，非性背景仍很大的话，则可在封闭液中加入Tween20，Tween20的存在，能降低背景噪声，且不影响抗体与靶抗原的结合。...

　　蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有成千种不同的蛋白质.蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务,到目前为止,还没有一个单独的或一套现成的方法能把任何一种蛋白质从复杂的混合物中提取出来,但对任何一种蛋白质都有可能选择一套适当的分离提纯程序来获取高纯度的制品....

1) 预电泳胶凝固后，拆卸制胶装置，将胶连同支持膜一起置于水平电泳槽上(要求，电泳槽面板上首先被液体石蜡浸润，在凝胶支持膜与电泳槽面板间无气泡)。...

　　蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来.每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白.蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段.粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开,由于此时样本体积大、成分杂,要求所用的树脂高容量、高流速,颗粒大、粒径分布宽.并可以迅速将蛋白与污染物分开,防止目...

实验动物(Laboratory Animal,LA)指由人工培育,来源清楚,遗传背景明确,对其携带的微生物和寄生虫实行,用于生命科学研究、药品与生物制品生产和检定,以及其他科学研究的动物.实验动物追溯其祖先,可来源于野生动物、经济动物(家畜、家禽)、警卫动物和观赏动物等,但却有别于这类动物.实验动物一般具有以下三大特点：...

　　亲和层析以蛋白质或生物大和结合在介质上的配基间的亲和力为基础.本实验采用磁座和结合有Ni2+的磁珠在变性或非变性条件下对融合蛋白进行分离纯化,只需通过“结合-清洗-洗脱”三个简单的操作步骤就可完成.该系统可根据样本量灵活调整磁珠用量,从而进行小量和大量蛋白纯化,并且磁珠可以再生使用....

　　Novagen公司出品的pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统,已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白.pET系列载体是利用大肠杆菌T7噬菌体系统进行表达的载体,其表达原理见下图....

　　一般的细菌用抗菌素就能将其杀灭,但也有些细菌却无论什么抗菌素都不怕.更让医生们束手无策的是,这种所谓的“耐性细菌”的种类还在不断增加....

透析袋是最常用的方法，透析袋有各種大小不同的網目，可以分開量不同的大小。常見的透明年糕紙，也有近似透析袋的作用；而香腸的腸衣也正是一種透析膜，可以透出水分及小。透析除盐原理：利用半透膜原理，透析袋为半透膜，水和盐离子等小可以通过，而大的蛋白质不能通过.器材：１．pH7.4，0.01M PB缓冲液，30%PEG２．纳氏试剂操作：１．透析大量除盐：将装有粗提物的透析袋悬于烧杯内，用透析1~2小时，再用PB置4℃透析换液多次，用纳氏试剂检查至透析液内无氨离子２．透析后，袋内水增多，用30%PEG浓缩,...

　　目前,蛋白质工程尚未有统一的定义.一般认为蛋白质工程就是通过基因重组技术改变或设计合成具有特定生物功能的蛋白质.实际上蛋白质工程包括蛋白质的分离纯化,蛋白质结构和功能的分析、设计和预测,通过基因重组或其它手段或创造蛋白质.从广义上来说,蛋白质工程是通过物理、化学、生物和基因重组等技术蛋白质或设计合成具有特定功能的新蛋白质....

　　5.取上述1%溶化的琼脂糖10ml放入60℃水浴中,加入预热的适当浓度的血清抗体迅速混匀,铺入切去的琼脂部分.冷却后,用不含抗体琼脂密封切口....

　　真空冷冻技术简称为冻干技术.国家质检总局锅炉压力容器检测研究中心主要从事真空冷冻干燥过程优化研究的专家介绍,冻干原理是在真空状态下,利用原理,使预先冻结的物料中的水分不经过冰的融化直接以冰态为水蒸气而除去,从而获得干燥制品的技术.实践表明,真空冷冻干燥脱水技术是一项适用于果蔬、肉类、水产、药品的护色、保鲜、保质及保持营养成分的高新加工技术....

　　蛋白质纯化实验过程中经常会出现各种各样的问题,这里汇集了实验中经常出现的问题,做了一个总结.蛋白质纯化推荐参考书籍：蛋白质纯化与实验鉴定指南、生物工程下游技术、...

与Southern或Northern blot杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变.以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水...

　　TNF的提取是将发酵菌体裂解，在一定的条件和溶液中，使被提取的TNF充分出来，经离心收集混合液中提取的TNF成份的过程。含有TNF的提取溶液中，含有大量的杂蛋白，由于蛋白质在水溶液中的溶解度主要取决于蛋白质表面的水数目，即蛋白质表面亲水基团与水形成水化膜的程度和带电荷的情况，当中性盐如硫酸铵等加入蛋白质溶液时，由于中性盐对水的亲和力大于蛋白质，使蛋白质周围的水化膜减弱或消失，蛋白质溶解度降低，同时由于中性盐的加入，蛋白质溶液的离子强度发生了改变，蛋白质表面电荷被大量中和，更加导致蛋白质溶解度降低，使蛋...

　　丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS或其它适当溶液洗去.因此,蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜,用丽春红染色后将目的条带切下用于测序....

　　以pET-32a(+)为例,介绍将目的基因克隆进载体并进行表达获得重组蛋白的过程,从而熟悉根据自己的要求采用不同的载体进行原核表达的全过程....

Novagen最新推出的Strep•Tag II 8氨基酸小标签,就是一个新选择.我们早已熟知biotin和streptavidin之间能够高度的结合,这种性结合早已广泛用于免疫或者非放标记反应中.Novagen模拟Biotin设计了一个8个氨基酸的小标签Strep•Tag II,正好能的结合到streptavidin上,又再优化streptavidin与小标签的结合位点,使之与Strep•Tag II融合标签的结合力超出普通streptavidin约100倍,称为Strep...