蛋白表达:Survivin蛋白在喉癌中的表达及临床意义
Survivin是近年来发现的一种新的凋亡蛋白,在肺癌、结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、淋巴瘤等肿瘤组织中选择性表达,而在正常成熟组织中为阴性 [1] .喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)是头颈部常见的恶性肿瘤,为了解喉鳞癌组织中Survivin的表达,本文采用免疫组织化学SP法对喉鳞癌组织中Survivin蛋白的表达进行了研究,报告如下....
蛋白质含量测定:人血清、血浆及相关液体样本中血清淀粉样蛋白A(SAA)含量的测定
1. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融;...
蛋白分离纯化:重组蛋白纯化的基本策略
分辨率:由选择的方法和层析介质生成窄峰的能力来实现.总的来说,当杂质和目标蛋白性质相似时,在纯化的最后阶段分辨率是重要因素. 1、通过组和各种方法使纯化步骤之间...
蛋白表达:Adeno-X 表达系统----最有效的腺病毒系统之一
腺病毒介导的基因转移可以在人细胞中最高水平地表达目的蛋白质 (1).因为含目的基因的重组腺病毒DNA是游离于细胞基因组外的 (不整合入宿主基因组),所以目的蛋白质得到瞬时的高水平表达.更重要的是利用腺病毒表达系统可以将外源基因转到及不的细胞中表达....
蛋白表达:原核表达条件优化
本实验中重组表达质粒PrP-pET-32a(+)不稳定的原因可能是PrP对E.coli BL21(DE3)具有细胞毒性.pET-32a(+)来源于pBR-322,pBR-322源于ColE1.ColE1、pBR-322 、pET- 32a(+)都失去了分配功能区par.而天然质粒具有功能区par,可以质粒在每次细胞周期中准确的进行分离,并均等的分配到子代细胞中去.功能区 par对质粒PrP-pET-32a(+)的稳定性是不可缺少的[4].缺少功能区par的pET-32a(+)质粒在每次细胞周期中随机分配到...
蛋白表达:优化基因表达的关键因素之:基因的重新设计和合成
遗传密码有64种,但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分.那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons),那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons).实际上用做蛋白表达或生产的每种生物(包括大肠杆菌,酵母,哺乳动物细胞,Pichia,植物细胞和昆虫细胞)都表现出某种程度的密码子利用的差异或偏爱.大肠杆菌、酵母、果蝇、灵长类等每种生物都有独特的8个密码子极少被利用[1].有趣的是,灵长类和酵母有6个同样的利用率低的密码子.大肠杆...
蛋白分离纯化:重组蛋白生产的问题
在传统的重组蛋白质分离纯化工艺中,大多采用经典的软凝胶分离介质,由于这种介质的颗粒较大,分离效率较差,因此常常需要采用多种不同模式的色谱操作联用对目标蛋白质进行纯化,才能得到纯度符合一定标准的目标蛋白质.另外,这种色谱介质的耐压性很差,只能在流速较低的情况下进行操作,分离纯化时间较长.分离纯化步骤多和分离时间长使得蛋白质的质量回收率和活性回收率很低.而且在传统的重组蛋白质生产工艺中,蛋白质的复性和纯化是生产过程中两个的单元操作,也在很大程度上制约着生产效率....
