细胞百科--生物岛网

正常关节软骨细胞的短期培养

  1.用手术刀片从关节表面削下软骨组织片,收集在PBS中。反复清洗除去软骨片表面的血液以及可能误带的滑膜组织。新鲜软骨呈乳白浅蓝色、半透明状,略具弹性;...

正乳腺上皮细胞培养

1. 于产后2-7d收集乳汁。用无菌水擦洗乳房,将乳汁挤入无菌容器。将收集的乳汁混合后,用RPMI1640稀释,以利于离心。...

FITC标记抗体-Chadwick氏法

  离心机及离心管、三角烧瓶(25ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线.荧光素的准备。按每毫克免疫球蛋白加0.01mg荧光素计算,称取所需的荧光素量,用3%重碳酸钠水溶液溶解;...

细胞生物学发展史

  1852年病理学家菲尔肖(1821-1902)在研究结缔组织的基础上提出“一切细胞来自细胞”的名言,并且创立了细胞病理学。...

FITC标记抗体-Marsshall氏法

  1.抗体的准备。量取适量已知浓度的球蛋白溶液,置入三角烧瓶中,加入生理盐水及碳酸盐缓冲液,使最终球蛋白浓度为20mg/ml,缓冲液容量为总量的1/10,混匀,将三角烧瓶置冰槽中,电磁搅拌速度适当,即以不起泡沫为宜搅拌5—10min;...

甲醇酵母细胞表达系统

此系统不仅具有高表达、高稳定、高分泌的特点,而且其宿主甲醇酵母—巴斯德毕赤酵母(Picchia pastoris)具有高密度生长的特性。甲醇酵母是可利用甲醇作为唯一碳源的酵母,主要有H.Polymorpha、Candida Bodinii、Pichia Pastoris三种,其中Pichia Pastoris作为基因表达系统使用得最多、最广泛。与以往的基因表达系统相比,它具有无可匹敌的高表达特性,已被认为是最具有发展前景的生产蛋白质的工具之一。因此近年来此表达系统的研究得到迅速发展,在其中表达...

电穿孔和电融合技术

  除了能使细胞膜具有通透性,让的扩散入胞液中以外,高强度的电场脉冲也能引起细胞融合,这一现象叫做电融合。然而,在用电脉冲融合前必须使细胞相互紧密接触,这一电融合方法在原生质融合制取杂交植物,胚胎细胞相互融合制备动物克隆方面非常有用,尤其在制取杂交瘤细胞制备单克隆抗体方面用处很大。几个实验室已证明使用电场电融合效率比常规的化学融合方法高10到100倍,最近,贴壁细胞的电融合还被用来研究细胞融合时细胞的骨架成分和细胞器的动力学重排。...

无菌操作注意事项

  【培养前准备】在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求,准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内,然后开始消毒。这可以避免开始实验后,因物品不全往返拿取而增加污染机会。...

细胞系的建立

  已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品。当前世界上已建的各种细胞系(株)已难胜数,我国也建有百种以上,并在不断增长中。...

磁化细胞分离器分离法(MACS)NK细胞

2. 将单个核细胞的浓度用含10%血清RPMI-1640调整为4×106/ml,加入到无菌的塑料平皿中,37℃,7.5%CO2中培养2h后,除去粘附于塑料的单核细胞和B细胞;...

外周血干细胞移植简介

1979年Goldman等为一组加速期或急变期慢性粒细胞白血病患者移植初诊时采集冻存的外周血细胞,使患者重新回到慢性期,开始了外周血造血干细胞移植(PBSCT)的临床应用。 80年代中期以后,由于细胞分离机性能提高,1990年以后G—CSF应用于PBSC动员获得成功之后,PBSCT得到迅速发展。...

一次性细胞培养皿等标明Tissue Culture Treated是什么意思

  聚苯乙烯透光性能好,具有较好的强度和易塑性,并且没有毒性,成为一次性细胞培养皿和培养板等一次性细胞培养耗材的首选材料(一般的磁带和CD盒也是用聚苯乙烯制成的)。然而聚苯乙烯表面是憎水的,所以需要经过表面的改性处理,变成亲水后才能适用于细胞培养。...

细胞计数及活力测试操作步骤

  在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞一般也要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否伤作用。复苏后的细胞也要检查活力,了解冻存和复苏的效果。...

移液器的正确操作和注意事项

  设定所需要的容量时应调整到大于设定容量值的1/4圈,再调至设定值,这样可排除机械间隙,使设定量值准确,即先将容量调节钮旋转超过目的容量值的1/4圈,再向下调至设定值。...

PriCells: 动物小血管内皮细胞的分离

2. 用细丝线结扎血管的一端,用镊子轻轻夹住结扎侧的末端,用一铁丝将扎住的末端捅进血管内,将血管翻转过来,使内皮细胞面向外。血管另一侧的末端也塞进血管内,用细丝线结扎住,使整个血管仅内皮细胞在外面。...

细胞生物学历史与展望

  在我国的基础学科发展规划中,细胞生物学与生物学,神经生物学和生态学并列为生命科学的四大基础学科。...

科学家解密免疫细胞形成机制

  过敏和哮喘影响很多人。肥大细胞是专门的免疫细胞,其不仅在这些疾病中起重要作用,而且在其它疾病如肥大细胞增多症,涉及肥大细胞数量增加的血液病中也起重要作用。众所周知,刺激肥大细胞发育的生长因子干细胞因子对于肥大细胞的形成至关重要。现在卡罗琳斯卡研究所和乌普萨拉大学的研究人员已经表明,情况并非如此。研究人员分析了慢性粒细胞白血病(血液病)患者的血液中的肥大细胞及其祖细胞。...

牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-消化刮脱法

  2.在另一平皿中加入少量0.1%Ⅰ型胶原酶溶液。37℃下消化5-10min,然后加入培养液终止消化。...

原代细胞DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法

1. 将盖片单层培养原代细胞从瓶中取出,立即用温Hanks液漂洗3—5s,以去除培养基中血清;...

细胞凝集反应的实验原理和方法

  凝集素(lectin)是一类含糖的(少数例外)并能与糖等性结合的蛋白质,它具有凝集细胞刺激细胞的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖连接,在细胞间形成桥的结果,加入与凝集素互补的糖可以细胞的凝集。...

正常大兔脑微血管内皮细胞的培养

2. 将脑皮质放入D-Hanks液中,漂洗数次后,将其剪碎。再移入含0.05%胰蛋白酶溶液的小瓶内,在37℃水浴中消化10—20min;...

正组织源性鼻咽上皮细胞的培养

1. 取胚龄4—6个月水囊引产的胚胎,在无菌条件下分离鼻咽粘膜。若取材于鼻咽癌活检组织,则须将组织置于含高浓度抗生素(青霉素500 IU/ml、链霉素500μg/ml)的Hanks液中,在4℃下处理1小时;...

HeLa细胞株

HeLa细胞株被George Gey分送给众研究单位(而未通知Lacks本人也未得到她的许可),因用作癌症研究而广为流传。至今已被视为“不死的”,也就是说此细胞株(不同于其他人类细胞)不会老死,而且可以不限次数的下去,而且已被培养出一个不间断的系列。...

细胞周期(Cell cycle)

1951 年霍华德等用32P-磷酸盐标记了蚕豆根尖细胞,通过放射自显影研究根尖细胞DNA合成的时间间隔,观察到32P之掺入不是在有丝期,而是在有丝前的间期中的一段时间内。发现间期内有一个DNA合成期(S期),32P只在这时才掺入到DNA;S期和期(M期)之间有一个间隙无32P掺入,称为G2 期,在M期和S期之间有另一个间隙称为G1 期,G1 期也不能合成DNA。...

细胞培养技术

  在无菌下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器血中,这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。...

不连续密度梯度分离法分离NK细胞

  ④以3倍体积的Hank’s液稀释细胞,置于聚蔗糖-泛影葡胺分层液上,离心,2000r/min,20min;...

毕氏酵母感受态细胞制备及

  将DNA直接加在冻结的酵母细胞上是本实验的关键之处(即使在冰上解冻的待细胞,其摄取外源DNA的能力也在解冻过程中迅速下降;如进行多样品的,按6样品/组进行);...

树突细胞的分离-用小鼠骨髓前体细胞培养树突

  8.小鼠GM-CSF(mGM-CSF):可以来源于纯化的重组蛋白,也可来源于转染小鼠GM-CSF基因的细胞系的条件培养基...

质膜及其表面结构

  质膜和内膜在起源、结构和化学组成的等方面具有相似性,故总称为生物膜(biomembrane)。生物膜是细胞进行生命活动的重要物质基础。...

细胞分化与肿瘤

  恶性肿瘤细胞的特征之一是分化程度低,表现为形态上的幼稚性,功能上的异常,细胞的多种表型(phenotype)又回到原始的胚胎细胞表型,即发生细胞的去分化现象。机体在致癌物质的作用下,干细胞发生分化障碍或已分化的细胞发生去分化,导致细胞增殖失控则形成肿瘤。不过目前多倾向于认为肿瘤来源于分化障碍的干细胞。...