⑴ 透析法:①适用于蛋白质含量低、样品体积小的抗体溶液的标记; ②标记较均匀,非荧光较低
⑵ 搅拌法:①适用于蛋白质含量较高、样品体积较大的抗体溶液的标记; ②标记时间短、效率较高,荧光素用量节省;③影响因素多,非荧光较强
将标记后的抗体溶液装于透析袋,于流动的自来水中透析约10min,然后移入pH=7.4的磷酸盐缓冲 液中,在4℃下透析,直至透析外液在紫外灯下不呈现荧光为止.
葡聚糖凝胶G25或G50,用pH=7.4的0.01%PBS溶胀后装柱,加入标记后的抗体溶液,然后用上述PBS洗脱,取洗脱液加入20%三氯醋酸使蛋白沉淀后,上清液中的荧光素应低于0.01ug/ml.
采用DEAE纤维素离子柱.将DEAE纤维素用pH=7.6的0.01mol/L磷酸盐缓冲液平衡装柱,加入标记抗体溶液,进行分步洗脱.未结合荧光素的抗体,所帶负电少,最先洗出.过量结合荧光素的抗体,所帶负电多,最后洗出.
将荧光抗体用同一正常组织或同种动物其它组织的组织粉预先吸收.按100mg组织粉/ml标记抗体比例混合, 4℃磁力搅拌1h,静置1h,离心取上清液,在用50mg/ml比例重复一次.
最新评论